師姐
誰(shuí)又把離心機(jī)轉(zhuǎn)冒煙了？修理工程師已經(jīng)把我們實(shí)驗(yàn)室拉黑了！
昨晚熬夜提外泌體來(lái)著，用超速離心法通過(guò)不同轉(zhuǎn)速逐步去除雜質(zhì)，不多運(yùn)行幾次，純度怎么保證??？這不又到了一批血液樣本，我準(zhǔn)備和之前的細(xì)胞上清一起離，這樣總能減少離心機(jī)壓力了吧。
師妹
師姐
你這是危險(xiǎn)操作??！啥樣本都一股腦超離提純，得率能好嗎？
?。康寐实筒皇菢颖镜膯?wèn)題么，超離法還能有錯(cuò)？
師妹
師姐
超離法沒(méi)錯(cuò)，但不同的樣本特性千差萬(wàn)別，選對(duì)合適的提純方法比努力更重要～ 文末附了 提純方法選擇思維導(dǎo)圖 ，你可以先看看。
那么如何快速精準(zhǔn)選擇適合自己的外泌體提純方法？宇玫博根據(jù)不同樣本個(gè)性化定制試劑盒，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果穩(wěn)定可靠，血液、尿液、細(xì)胞上清甚至是植物等，統(tǒng)統(tǒng)不在話下。即使是沒(méi)有離心機(jī)的小伙伴也能輕松 get 高純度外泌體。點(diǎn)擊下方圖片，免費(fèi)申請(qǐng)?jiān)囉谩?/strong>
聚乙二醇 PEG 沉淀法搭配 EPF 純化柱試劑盒
陰離子交換層析法試劑盒（無(wú)需離心機(jī)）
以下視頻詳細(xì)解答了外泌體提取純化過(guò)程中，不同樣本的特性及各自合適的提純方法，包你提升外泌體純度及得率~
常見(jiàn)的外泌體提純技術(shù)
1. 傳統(tǒng)超速離心技術(shù)
作為早期文獻(xiàn)提到的標(biāo)準(zhǔn)，超速離心法是科研人最先接觸到的，也是大多數(shù)的選擇，但是往往超離得率非常低（15%左右），很難拿到結(jié)果；對(duì)于高成本樣本諸如細(xì)胞培養(yǎng)上清，提純得率低會(huì)間接導(dǎo)致成本上升；而且超離的除菌能力非常雞肋，很多情況下超離后的樣本依然會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞污染；最后，使用過(guò)程中諸如管子爆裂，設(shè)備排隊(duì)，長(zhǎng)時(shí)間操作，轉(zhuǎn)子損壞維修時(shí)間長(zhǎng)等問(wèn)題也是很多實(shí)驗(yàn)室面臨的常規(guī)隱患。
2. 經(jīng)典 PEG 沉淀法
作為比較經(jīng)典的提取方法，PEG 沉淀法幾乎兼容所有樣本，例如細(xì)胞上清、血液、組織、尿液、乳液、體液等等，得率較高（35～40%），操作簡(jiǎn)便-全程不到兩個(gè)小時(shí)，性價(jià)比高，但混雜蛋白干擾多，對(duì)于做常規(guī)檢測(cè)和 RNA 測(cè)序來(lái)說(shuō)，需要結(jié)合 EPF 柱除菌和游離的核酸以及大的囊泡等，而宇玫博試劑盒將沉淀法和 EPF 柱進(jìn)行結(jié)合，提供更省時(shí)省力的解決手段。
● 2024 年 6 月發(fā)表在 Molecular cancer 上的一篇文章【1】就使用了宇玫博外泌體提取純化試劑盒（UR52121））進(jìn)行膽囊癌細(xì)胞外泌體提取，結(jié)果符合各檢測(cè)指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)一種新穎且有廣泛應(yīng)用價(jià)值的膽囊癌血管生成生物標(biāo)志物，為未來(lái)的膽囊炎治療提供更多參考思路。
● 無(wú)獨(dú)有偶，同一個(gè)試劑盒被使用進(jìn)行大腸桿菌的膜外囊泡的提取，助力客戶帕金森病研究【2】。該研究揭示了風(fēng)險(xiǎn)基因，如富亮氨酸重復(fù)蛋白激酶 2（LRRK2）和環(huán)境因素互作觸動(dòng)神經(jīng)元內(nèi) α-突觸核蛋白（α-syn）啟動(dòng)帕金森的機(jī)制，為后續(xù)帕金森的治療開(kāi)辟新途徑。
心動(dòng)不如行動(dòng)，趕快點(diǎn)擊下方圖片，申請(qǐng)?jiān)囉糜蠲挡?PEG 沉淀法外泌體提取試劑盒~
3. 尺寸排阻-SEC 組合法
對(duì)于蛋白組學(xué)來(lái)講，實(shí)驗(yàn)往往需要結(jié)合尺寸排阻-SEC 法提純外泌體，幫助排除雜蛋白干擾，檢測(cè)相對(duì)低豐度的蛋白。
而且，尺寸排阻-SEC 法組合操作后外泌體純度高、生物活性好，整個(gè)純化過(guò)程控制在 30 分鐘內(nèi)。ExoPura? Basic 外泌體純化柱試劑盒（UR52180）適用于澄清度高的非復(fù)雜生物樣本（如細(xì)胞上清、牛奶澄清液等）中外泌體囊泡的分離和純化，且可重復(fù)使用。但 SEC 法對(duì)于雜蛋白去除率高達(dá) 94%，所以該實(shí)驗(yàn)對(duì)樣本量和初始的蛋白濃度有要求，也就是說(shuō)，需要準(zhǔn)備較多的樣本量。感興趣的話，趕快點(diǎn)擊下圖申請(qǐng)?jiān)囉冒伞?/p>
4. 陰離子交換層析法
沒(méi)有高速離心機(jī)的實(shí)驗(yàn)室，可以選擇陰離子交換層析法（UR52172）解決外泌體提純，上樣到獲得外泌體僅需 1 小時(shí)；高度適配于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等非粘稠性樣本，無(wú)剪切力，保留外泌體的完整性和生物活性；層析法純度更高，回收率 30%，粒徑均一且重復(fù)性好。不過(guò)，如果后續(xù)外泌體濃度偏低，可考慮結(jié)合超濾管做濃縮。還在猶豫什么，手快的科研人已經(jīng)享受上「無(wú)離心煩惱」的提取方式啦，點(diǎn)擊下方圖片申請(qǐng)?jiān)囉?~
對(duì)于細(xì)胞上清樣本而言，前期使用不同類型的外泌體培養(yǎng)基，對(duì)后期的提純效果也有不同影響，具體見(jiàn)表 1。
表 1 各類培養(yǎng)基優(yōu)缺點(diǎn)總結(jié)表
在細(xì)胞培養(yǎng)源頭把雜蛋白種類控制好，采用化學(xué)成分限定培養(yǎng)基，能從根本上使外泌體純化變簡(jiǎn)單，直接采用沉淀法 + EPF 柱，即可獲取比較高純度的外泌體，減少提取純化鏈路，減少操作過(guò)程的外泌體損失。外泌體專用無(wú)血清培養(yǎng)基（U51102）適用于腫瘤細(xì)胞和 T 細(xì)胞等，且不含生長(zhǎng)因子，細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中無(wú)需添加血清即可達(dá)到完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)狀態(tài)，有利于外泌體的收獲。
● 空軍軍醫(yī)醫(yī)科大學(xué)西京醫(yī)院的教授團(tuán)隊(duì)在 Journal of neuroinflammation 發(fā)表研究【3】聯(lián)合使用 Umibio 去外泌體胎牛血清（UR50202）進(jìn)行胰腺腺泡細(xì)胞的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，在排除外源顆粒干擾下保證了細(xì)胞的正常生長(zhǎng)及外泌體的正常分泌，為接下來(lái)的外泌體提取純化實(shí)驗(yàn)提供了高質(zhì)量的細(xì)胞上清。
●更有文章【4】直接集齊三類宇玫博王牌產(chǎn)品（外泌體專用培養(yǎng)基-UR51102；外泌體提取純化試劑盒-UR52121；外泌體標(biāo)記用的外泌體紅色熒光標(biāo)記染料（PKH26-UR52302 & 外泌體綠色熒光標(biāo)記染料（PKH67）-UR52303），助力福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院檢驗(yàn)科曹穎平教授團(tuán)隊(duì)在 Cellular & Molecular Biology Letters 發(fā)表相關(guān)研究，為臨床解決高毒力肺炎克雷伯菌相關(guān)的膿毒癥所致急性肺損傷提供新的靶點(diǎn)和理論依據(jù)。
宇玫博還研制了外泌體專用間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基，適用于 MSC 細(xì)胞的無(wú)血清、化學(xué)成分限定的培養(yǎng)基，專門用于該類細(xì)胞外泌體的制備與生產(chǎn)。而且細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中無(wú)需添加血清或血小板裂解物，很大程度減少外源顆粒的干擾，促進(jìn) MSC 細(xì)胞分泌外泌體。點(diǎn)擊下圖一鍵試用~
宇玫博試劑盒針對(duì)性處理多種樣本，一鍵解鎖外泌體提純外掛。更有百篇文獻(xiàn)助力，結(jié)果安全可靠，如果你還在猶豫選擇什么提純方法，建議保存下方的思維導(dǎo)圖，包你速成外泌體提純專家！
內(nèi)容策劃：王丹琦
內(nèi)容審核：吳軍
題圖來(lái)源：自己做的
參考文獻(xiàn)
[1] Exosomal long non-coding RNA TRPM2-AS promotes angiogenesis in gallbladder cancer through interacting with PABPC1 to activate NOTCH1 signaling pathway. Mol Cancer. 2024 Mar 27;23(1):65.
[2] Escherichia coli triggers α-synuclein pathology in the LRRK2 transgenic mouse model of PD. Gut Microbes. 2023 Dec;15(2):2276296.
[3] Optimized rAAV8 targeting acinar KLF4 ameliorates fibrosis in chronic pancreatitis via exosomes-enriched let-7s suppressing pancreatic stellate cells activation. Mol Ther. 2024 Aug 7;32(8):2624-2640.
[4] Exosomal miR-155-5p drives widespread macrophage M1 polarization in hypervirulent Klebsiella pneumoniae-induced acute lung injury via the MSK1/p38-MAPK axis, Cell Mol Biol Lett. 2023 Nov 13;28(1):92. doi: 10.1186/s11658-023-00505-1.
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