支原體污染一直是細(xì)胞培養(yǎng)的一顆「定時(shí)炸彈」，由于前期發(fā)生時(shí)較難被觀測，往往在發(fā)現(xiàn)時(shí)就已經(jīng)來不及了。這次小王的實(shí)驗(yàn)室又遇到了支原體感染危機(jī)，他不斷復(fù)盤試圖找到真正原因：
這么貴的細(xì)胞，也是正規(guī)渠道購買！收到的「心肝寶貝」肯定不會有污染！
嚴(yán)格執(zhí)行「無菌操作」，多樣本處理也做好了隔離和標(biāo)記，不存在交叉污染！
那就可能是……細(xì)胞培養(yǎng)基/血清被污染了！
經(jīng)過排查，這次感染的「罪魁禍?zhǔn)住?，居然是這次培養(yǎng)使用的血清中含有支原體。那如何才能防范培養(yǎng)基/血清源頭發(fā)生的支原體污染呢？如何選擇高質(zhì)量血清/培養(yǎng)基？本文整理 3 點(diǎn)容易被忽視因素，祝大家實(shí)驗(yàn)順利。同時(shí)，我們還準(zhǔn)備了有獎(jiǎng)?wù){(diào)研，點(diǎn)擊此處參與或文末完成問卷，即有機(jī)會贏折疊燒水壺、定制衛(wèi)衣、京東卡等150 份驚喜好禮！
細(xì)胞培養(yǎng)中，細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)用成分、培養(yǎng)基 pH 值、培養(yǎng)條件等都影響著細(xì)胞培養(yǎng)的效果。
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關(guān)注血清質(zhì)量
血清為細(xì)胞生長提供必需的基本營養(yǎng)物質(zhì)、激素和各種生長因子，以及結(jié)合蛋白等物質(zhì)維持細(xì)胞生存環(huán)境，促進(jìn)細(xì)胞生長，保護(hù)細(xì)胞。當(dāng)前市售血清各種各樣，選擇合適的血清對于保證細(xì)胞生長狀態(tài)至關(guān)重要。血清中蛋白含量是非常重要的指標(biāo)，其中，球蛋白含量是重要的指標(biāo)，含量越低，血清質(zhì)量越高；血紅蛋白也是越低越好。雖然血紅蛋白含量高低可能不直接影響血清質(zhì)量，但其體現(xiàn)著采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度，有助于篩選合適的高質(zhì)量、質(zhì)量穩(wěn)定的血清。
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避免各種微生物及支原體污染
在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，容易影響細(xì)胞生長而又很容易忽視的就是支原體的污染。支原體是微小的生物，需要通過 0.1 um 孔徑的濾膜去除。支原體、病毒的污染在顯微鏡下也難以觀察，但會影響細(xì)胞生長，會嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。高質(zhì)量的血清/細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品多是通過 0.1 um 的濾膜過濾，在細(xì)胞培養(yǎng)基準(zhǔn)備過程中去除支原體污染。常用的賽默飛 Nalgene 0.1 um 無菌過濾裝置，被稱為降低細(xì)胞培養(yǎng)污染的最后一道防線。
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選擇高質(zhì)量血清/培養(yǎng)基
血清的促生長效果，也就是通過培養(yǎng)細(xì)胞來驗(yàn)證，適合所用細(xì)胞系生長的血清才是最合適的。
對于血清選擇來說，血清的來源是一個(gè)首要篩選因素，受飼養(yǎng)環(huán)境及生產(chǎn)工藝影響，一般原產(chǎn)澳洲或新西蘭的血清品質(zhì)較好。其次看血清的外觀，高質(zhì)量的胎牛血清呈黃色或紅色，蛋白和脂類物質(zhì)含量低，表現(xiàn)為稀薄、清亮，而新生牛血清相對粘稠，顏色略深。而偶爾會見到的血清沉淀物跟生產(chǎn)工藝相關(guān)，除對細(xì)胞顯微觀察會有影響外，基本不影響細(xì)胞生長。
在這里有個(gè)竅門分享給大家：血清/細(xì)胞培養(yǎng)基選擇過程中，也可以直接通過產(chǎn)品的外在包裝等評估其價(jià)值。如老話所說「好馬配好鞍」，高品質(zhì)的血清/細(xì)胞培養(yǎng)基等為了保證產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，多選擇高質(zhì)量的包裝瓶產(chǎn)品，如血清瓶上的「Nalgene」標(biāo)志。Nalgene 血清瓶，以其美國藥典 VI 標(biāo)準(zhǔn)、無細(xì)胞毒性、通過嚴(yán)格的防漏認(rèn)證、高氣體阻隔作用聞名業(yè)界，是血清/細(xì)胞培養(yǎng)基等 pH 敏感樣品的理想容器。
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題圖來源：圖蟲創(chuàng)意
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