來源：青椒醫(yī)學(xué)
巧婦難為無米之炊。工欲善其事必先利其器。
研究方案中「關(guān)鍵實驗技術(shù)（手段）」的系統(tǒng)性學(xué)習(xí)和理解，將極大提升你對研究方案的把控能力和設(shè)計能力，運籌帷幄，決勝千里，以不變應(yīng)萬變。
例如你知道 WB 的實驗?zāi)康氖鞘裁磫?？難道只是檢測表達(dá)水平？那么 WB 能定量計算蛋白豐度嗎？如果能那為何又有 ELISA 這種技術(shù)？
技術(shù)之間有互補(bǔ)性
技術(shù)之間，是相互互補(bǔ)的，又不可替代，這需要進(jìn)一步地理解和學(xué)習(xí)。理解關(guān)鍵實驗技術(shù)（手段）的原理特點和實驗?zāi)康?，和可能的實驗結(jié)論，有助于研究方案的創(chuàng)新和優(yōu)化。
給大家進(jìn)行了總結(jié)，有不足之處請在留言區(qū)留言，協(xié)助我們更正：
1. 檢測 RNA 分子在組織和細(xì)胞空間分布和表達(dá)豐度的技術(shù)：活細(xì)胞動態(tài) RNA 成像技術(shù)、單分子 RNA FISH 原位雜交、多分子 RNA Scope 原位雜交技術(shù)、細(xì)胞核-細(xì)胞質(zhì)分離結(jié)合 qPCR、單細(xì)胞測序技術(shù)、空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)、Northern blot、dot blot 等等；
2. 檢測蛋白分子的空間分布和表達(dá)豐度的技術(shù)：免疫熒光、免疫組化、細(xì)胞核-細(xì)胞質(zhì)分離結(jié)合 WB、GFP 標(biāo)簽融合蛋白示蹤技術(shù)、空間蛋白質(zhì)組學(xué)等等；
3. 檢測 DNA 拷貝數(shù)、突變與否的技術(shù)：FISH 原位雜交、qPCR、基因組測序等等。
4. 檢測某蛋白分子總的表達(dá)量（不含空間信息）：ELISA 技術(shù)（定量）、western blot 技術(shù)（半定量，不準(zhǔn)確）；
5. 檢測某蛋白分子的分子量大?。ú缓臻g信息）：分子篩層析法、western blot 技術(shù)、雙向 2D 電泳、質(zhì)譜分析等等；
6. 檢測某蛋白分子的高級結(jié)構(gòu)信息：蛋白結(jié)晶后冷凍電鏡解析高級結(jié)構(gòu)、分子對接分析等等；
7. 分子表達(dá)干預(yù)技術(shù)：分子克隆操縱表達(dá)技術(shù)、病毒載體過表達(dá)或者敲減表達(dá)（shRNA、siRNA）、點突變技術(shù)、CRISPR 敲除或者敲入技術(shù)、CRISPRi 沉默技術(shù)、功能區(qū)分段（truncate）敲除技術(shù)、靶蛋白小分子抑制劑或者單抗抑制劑等等；
8. 體內(nèi)水平探索分子功能：類器官、PDX 模型、裸鼠皮下成瘤、各種 XXX 疾病動物模型、活體成像技術(shù)等；
9. 細(xì)胞功能探索：細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期檢測、細(xì)胞衰老、細(xì)胞干性、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞焦亡、炎癥風(fēng)暴、遷移、侵襲能力，表面受體表達(dá)等等；亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的囊泡和細(xì)胞器的分離和電鏡影像學(xué)觀察；
10. 分子間互作實驗方法：RNA、DNA、蛋白之間的互作分析技術(shù)如下圖；
11. 新疾病分子、通路的尋找：蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)、全轉(zhuǎn)錄組測序、生物信息學(xué)分析等等；
關(guān)鍵技術(shù)上，也要量力而為，一定要符合本單位的硬件技術(shù)設(shè)施定位，且不可為了新而新，寫一些天馬行空，脫離實際的技術(shù)手段上去，評審專家也會提出質(zhì)疑。
2023 年度國自然醫(yī)學(xué)部 50 大科研熱點中標(biāo)數(shù)統(tǒng)計如下：
如果大家想進(jìn)一步與同行、國自然資深講師交流，并獲取一手動態(tài)和熱點方向，可以加入「國自然基金撰寫交流社群」哦。群內(nèi)也會定期為大家分享優(yōu)質(zhì)課程、撰寫經(jīng)驗、模板資料等。
因加群火爆，達(dá)到 200 上限后無法直接進(jìn)群，
麻煩先加小助手企微再拉你～
熱門跟貼