常染色體顯性遺傳視網(wǎng)膜色素變性（Autosomal Dominant Retinitis Pigmentosa, adRP）是一種由顯性基因突變 (致病基因位于常染色體) 引發(fā)的進(jìn)行性視網(wǎng)膜退行性疾病，典型表現(xiàn)為夜盲、視野進(jìn)行性縮小、視桿與視錐細(xì)胞逐漸凋亡，最終導(dǎo)致視力嚴(yán)重下降或失明。其發(fā)病年齡和進(jìn)展速度因突變基因而異，多伴有家族遺傳史。在該疾病中，Rhodopsin基因（RHO編碼視紫紅質(zhì)蛋白）是最常見的致病基因之一，約占adRP病例的25%-30%。其致病機(jī)制復(fù)雜，治療困難，因此探索新型治療方法非常有意義。
近日，湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)部谷峰教授課題組在國際期刊Molecular Therapy發(fā)表了題為Correcting a patient-specific Rhodopsin mutation with adenine base editor in a mouse model的研究論著。團(tuán)隊(duì)成功構(gòu)建了基因敲入小鼠疾病模型，通過在小鼠視網(wǎng)膜下注射腺相關(guān)病毒（AAV），遞送腺嘌呤堿基編輯器和特異性靶向點(diǎn)突變的sgRNA進(jìn)行治療。
圖1.文章發(fā)表截圖
RHO基因位于人類第3號染色體短臂（3q22.1），包含5個(gè)外顯子，編碼含348個(gè)氨基酸的視紫紅質(zhì)蛋白（Rhodopsin）。T17M（Rhodopsin-c.C50T; p.T17M）點(diǎn)突變位于RHO基因的1號外顯子且為突變熱點(diǎn)。本研究首先利用CRISPR/Cas9技術(shù)成功構(gòu)建了hT17M基因敲入小鼠模型，該小鼠含有75bp的人源化DNA片段（包含T17M點(diǎn)突變）。通過ERG、OCT、熒光素眼底血管造影、HE染色和免疫熒光等實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)12月齡的hT17M基因敲入小鼠表現(xiàn)為a波和b波波幅明顯降低、視網(wǎng)膜外核層厚度以及內(nèi)節(jié)/外節(jié)層厚度變薄、視網(wǎng)膜血管變細(xì)，與患者的臨床表型高度相符。
為了進(jìn)一步探索基因編輯治療效果，本研究利用雙AAV策略，將ABE8e分成兩部分，分別為TadA-nCas9N 和 nCas9C，AAV同時(shí)攜帶靶向T17M突變的sgRNA。通過視網(wǎng)膜下注射進(jìn)行基因治療。研究發(fā)現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)在DNA水平最高可以達(dá)到13.4%的修復(fù)效率，在mRNA水平最高可以達(dá)到39.7%。，治療后的小鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)和功能顯著改善。
這些研究表明，hT17M基因敲入小鼠模型能夠重現(xiàn)adRP患者的臨床特征，為遺傳性顯性視網(wǎng)膜色素變性（adRP）疾病的機(jī)制探索和潛在治療策略提供了重要疾病模型，同時(shí)腺嘌呤堿基編輯技術(shù)介導(dǎo)的基因治療具有較好的治療效果，能夠有效阻止光感受器細(xì)胞死亡，進(jìn)一步改善了小鼠視網(wǎng)膜的結(jié)構(gòu)和功能。該研究為腺嘌呤堿基編輯技術(shù)應(yīng)用于該類病人的臨床治療奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，同時(shí)為其他遺傳病的分子治療提供了重要參考。
論文第一作者為湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)部科研助理/溫州醫(yī)科大學(xué)2019級碩士研究生何曉雪、溫州醫(yī)科大學(xué)2021級碩士研究生嚴(yán)彤、河南省人民醫(yī)院宋宗明主任醫(yī)師和溫州醫(yī)科大學(xué)2024級博士研究生項(xiàng)略，通訊作者為谷峰教授。本項(xiàng)研究得到了國家和湖南省多個(gè)項(xiàng)目的支持。
https://www.cell.com/molecular-therapy-family/molecular-therapy/abstract/S1525-0016(25)00195-9
制版人：十一
BioArt
Med
Plants
人才招聘
會議資訊
學(xué)術(shù)合作組織
（*排名不分先后）
戰(zhàn)略合作伙伴
（*排名不分先后）
轉(zhuǎn)載須知
【非原創(chuàng)文章】本文著作權(quán)歸文章作者所有，歡迎個(gè)人轉(zhuǎn)發(fā)分享，未經(jīng)作者的允許禁止轉(zhuǎn)載，作者擁有所有法定權(quán)利，違者必究。
熱門跟貼