2025年4月27日，NMPA公布了創(chuàng)新醫(yī)療器械特別審查申請審查結(jié)果公示（2025年第4號），有9款產(chǎn)品進(jìn)入創(chuàng)新通道。其中包括，廣州市金圻睿生物科技有限責(zé)任公司申請的結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群耐藥基因突變檢測試劑盒（可逆末端終止測序法）。
# 結(jié)核病
結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis, MTB）引起的嚴(yán)重傳染病，是全球公共衛(wèi)生的重大威脅之一。根據(jù)世界衛(wèi)生組織（WHO）發(fā)布的《2022年全球結(jié)核病報告》：
2021年，全球共有160萬人死于結(jié)核病，包括18.7萬例結(jié)核病/艾滋病毒（TB/HIV）雙重感染患者。結(jié)核病是全球第13大死因，僅次于COVID-19。
2021年，全球新發(fā)耐多藥和利福平耐藥（MDR/RR-TB）結(jié)核病患者達(dá)45萬例，而其治療成功率僅為60%。
全球新發(fā)MDR/RR-TB患者中，僅有16.1萬例接受了治療，仍有28.9萬例未能及時診治，占比近65%。
中國是結(jié)核病、艾滋病毒感染相關(guān)結(jié)核病以及耐多藥和利福平耐藥結(jié)核病（MDR/RR-TB）的高負(fù)擔(dān)國家之一。2021年，中國結(jié)核病估算發(fā)病人數(shù)占全球總數(shù)的7.4%，位居第三。耐藥結(jié)核病的治療成功率僅為53%，遠(yuǎn)低于普通結(jié)核病的95%。
▲全球結(jié)核病、艾滋病毒感染相關(guān)結(jié)核病和耐藥結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家名單
耐藥結(jié)核病的嚴(yán)峻形勢
耐藥結(jié)核病的出現(xiàn)進(jìn)一步加劇了結(jié)核病的防控難度。耐多藥結(jié)核病（MDR-TB）和廣泛耐藥結(jié)核?。╔DR-TB）對一線抗結(jié)核藥物（如利福平、異煙肼）產(chǎn)生耐藥性，導(dǎo)致治療難度增加、治愈率下降和死亡率上升。耐藥結(jié)核病的傳播不僅增加了公共衛(wèi)生負(fù)擔(dān)，還對患者造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)和健康負(fù)擔(dān)。
傳統(tǒng)檢測方法的局限性
傳統(tǒng)的耐藥性檢測方法主要依賴于細(xì)菌培養(yǎng)和藥敏試驗，這些方法耗時長（通常需要數(shù)周甚至數(shù)月），無法滿足快速診斷和精準(zhǔn)治療的需求。此外，傳統(tǒng)方法的靈敏度和特異性較低，難以準(zhǔn)確檢測低豐度的耐藥突變?？焖俜肿訖z測雖然能夠提供較快的結(jié)果，但僅能識別有限的耐藥性突變，無法全面覆蓋所有耐藥相關(guān)基因。
#可逆末端終止測序法
經(jīng)查詢了解，可逆末端終止測序法（Reversible Terminator Sequencing，簡稱RTS）是一種高精度的DNA測序技術(shù)，屬于新一代測序（Next Generation Sequencing, NGS）技術(shù)的一種。其核心原理是通過在DNA合成過程中使用帶有可逆終止基團(tuán)的核苷酸，實現(xiàn)單堿基分辨率的測序。
具體步驟如下：
DNA模板固定：將待測序的DNA片段固定在固體表面（如測序芯片）上。
引物結(jié)合：在DNA模板上結(jié)合一個短的引物，作為DNA合成的起始點。
核苷酸添加：在DNA聚合酶的作用下，帶有可逆終止基團(tuán)的核苷酸（dNTP）被逐個添加到引物的3'末端。每次添加的核苷酸帶有不同的熒光標(biāo)記，用于區(qū)分不同的堿基。
熒光檢測：每次添加一個核苷酸后，通過熒光成像系統(tǒng)檢測熒光信號，確定添加的堿基類型。
終止基團(tuán)去除：在檢測完一個堿基后，通過化學(xué)方法去除終止基團(tuán)，使DNA鏈能夠繼續(xù)延伸。
重復(fù)循環(huán)：重復(fù)上述步驟，逐個添加核苷酸并檢測熒光信號，直到完成整個DNA片段的測序。
該技術(shù)具有高精度、高通量、快速檢測和低背景干擾的特點。它通過逐個添加核苷酸并檢測熒光信號，能夠?qū)崿F(xiàn)單堿基分辨率的測序，從而顯著提高測序的準(zhǔn)確性和靈敏度。同時，該技術(shù)可以在同一測序芯片上同時進(jìn)行多個DNA片段的測序，大大提高了測序效率。
此外，整個測序過程可以在較短時間內(nèi)完成，非常適合快速診斷和臨床應(yīng)用。由于每次只添加一個核苷酸，背景熒光信號較低，這進(jìn)一步提高了信噪比，確保了檢測結(jié)果的可靠性。
# 靶向測序技術(shù)（tNGS）
靶向測序技術(shù)（tNGS）將超多重PCR/雜交捕獲與二代測序的優(yōu)勢整合，通過其高度準(zhǔn)確的特異性和廣泛的基因組覆蓋能力，能夠更加精確地分析特定基因區(qū)域的變異情況，提供更全面、更準(zhǔn)確的耐藥性信息，為耐藥結(jié)核的早期診斷、個性化治療、防控策略分析提供有力工具。其技術(shù)優(yōu)勢可歸納為以下幾點：
檢測成本及耗時較低
不受人類基因組及背景菌影響
強化表型基因檢測性能
對病原體進(jìn)行真實定量檢測
強化RNA病毒、胞內(nèi)菌以及被吞噬病原體檢測能力
# 結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群耐藥基因突變檢測試劑盒（可逆末端終止測序法）
結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群耐藥基因突變檢測試劑盒（可逆末端終止測序法）基于靶向測序技術(shù)（tNGS），將超多重PCR與二代測序技術(shù)相結(jié)合，通過以下步驟實現(xiàn)高精度的耐藥基因檢測：
樣本處理：采用物理研磨和生化酶解相結(jié)合的方法，實現(xiàn)高效破壁，確保樣本中結(jié)核分枝桿菌的DNA能夠充分釋放。
多重PCR擴(kuò)增：針對結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（MTBC）的耐藥基因，設(shè)計多對引物，覆蓋13個耐藥基因的200多個突變位點。通過超多重PCR擴(kuò)增，確保每個靶標(biāo)區(qū)域都能被充分?jǐn)U增。
測序：采用可逆末端終止測序法（SBS），通過邊合成邊測序的方式，實現(xiàn)高精度的單核苷酸多態(tài)性（SNP）檢測。測序過程中設(shè)置內(nèi)參基因和空白對照，避免環(huán)境病原體污染。
數(shù)據(jù)分析：利用自主研發(fā)的核心算法，對測序數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，精準(zhǔn)識別耐藥基因突變，并評估耐藥異質(zhì)性。
檢測范圍覆蓋結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（MTBC）及12種一線/二線抗結(jié)核藥物的耐藥基因（13個耐藥基因，200多個突變位點）。并且采用一管法PCR建庫技術(shù)，所有反應(yīng)過程在同一管內(nèi)完成，有效避免建庫過程中的氣溶膠污染。測序運行時間低于5小時，實驗總周期（TAT）小于12小時，能夠快速提供檢測結(jié)果。
技術(shù)優(yōu)勢
早期檢測：靈敏度低至50個菌/mL，能夠檢測到低濃度的分枝桿菌DNA，甚至在感染初期就能夠捕獲耐藥變異，從而在早期診斷中發(fā)揮著重要作用；
多基因耐藥性分析：允許多種抗生素耐藥基因平行分析，快速而準(zhǔn)確地預(yù)測耐藥性；
流行病學(xué)和傳播途徑分析：可以用于分析不同菌株之間的遺傳關(guān)系，揭示傳播途徑，有助于制定更有針對性的結(jié)核防控策略；
加速診斷和研究流程：高通量性能使得整個檢測和分析流程更加高效，在較短時間內(nèi)提供豐富的信息，加速結(jié)核耐藥性的研究和臨床應(yīng)用。
# 臨床數(shù)據(jù)
根據(jù)金圻睿生物發(fā)布的研究數(shù)據(jù)，其結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群耐藥基因突變檢測試劑盒（可逆末端終止測序法）在臨床樣本中的表現(xiàn)如下：
研究共納入143株結(jié)核分枝桿菌（MTB）臨床分離株和158份支氣管肺泡灌洗液（BALF）樣本。
與傳統(tǒng)方法的對比，tNGS與表型抗菌藥物敏感性試驗（AST）的一致性平均為95.10%，與全基因組測序（WGS）的一致性平均為97.05%。
在158份BALF樣本中，tNGS陽性率為87.95%（73/83），高于Xpert MTB/RIF的80.72%（67/83）。
另外，tNGS能夠檢測到全部45種耐藥相關(guān)基因的突變，且與表型AST的耐藥率差異不超過5%。
# 同類型產(chǎn)品
Cepheid的Xpert MTB/RIF
Cepheid的Xpert MTB/RIF基于實時熒光定量PCR技術(shù)，快速檢測結(jié)核分枝桿菌和利福平耐藥，靈敏度為133個菌/mL，特異性高，檢測時間僅需2小時。該產(chǎn)品適合臨床快速篩查，能夠快速提供診斷結(jié)果，幫助醫(yī)生及時調(diào)整治療方案。
Hain Lifescience的GenoType MTBDRplus
Hain Lifescience的GenoType MTBDRplus采用線性探針雜交技術(shù)，檢測結(jié)核分枝桿菌、利福平和異煙肼耐藥，靈敏度和特異性均為中等，檢測時間為48小時。該產(chǎn)品適合常規(guī)耐藥檢測，能夠為臨床提供基礎(chǔ)的耐藥信息。
Becton Dickinson的BD MAX MDR-TB
Becton Dickinson的BD MAX MDR-TB基于實時熒光定量PCR技術(shù)，能夠檢測結(jié)核分枝桿菌、利福平、異煙肼和喹諾酮類耐藥基因，靈敏度和特異性較高，檢測時間僅需2小時。該產(chǎn)品適合快速耐藥檢測，能夠為臨床提供多種耐藥基因的檢測結(jié)果，幫助醫(yī)生制定更精準(zhǔn)的治療方案。
# 關(guān)于金圻睿
廣州市金圻睿生物科技有限責(zé)任公司（簡稱“金圻?！保┯?016年成立，聚焦于精準(zhǔn)醫(yī)療體外診斷產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)、銷售，致力于滿足臨床各類型的應(yīng)用需求，提供適用各類醫(yī)療機構(gòu)真正本地化的精準(zhǔn)分子診斷整體解決方案。
金圻?；谧灾鲃?chuàng)新研發(fā)了多重PCR、超多重靶向測序（tNGS）、宏基因組（mNGS）、腫瘤NGS等技術(shù)和系列自動化儀器設(shè)備，取得了多項核心技術(shù)發(fā)明專利，實現(xiàn)了腫瘤+感染多層次雙產(chǎn)品線布局。
其中，多重PCR熔解曲線專利技術(shù)，實現(xiàn)了單管一次性可檢測二十五重靶標(biāo)；超多重靶向病原測序技術(shù)，實現(xiàn)了單管檢測超千重靶標(biāo)；MetaCAP宏捕獲技術(shù)，重點捕獲3000多種臨床感染相關(guān)病原體，可檢測兩萬多種微生物及其耐藥和毒力基因。上述特色技術(shù)已開發(fā)了呼吸道、生殖道、消化道等多種多重病原體檢測試劑。
2020年，金圻睿的KMMiniSeqDx-CN基因測序儀獲得NMPA三類注冊證；2022年，腫瘤多基因檢測試劑盒獲得NMPA三類注冊證。金圻睿是國內(nèi)為數(shù)不多可提供基因測序儀+臨床應(yīng)用+軟件的腫瘤伴隨診斷系統(tǒng)解決方案的公司之一。
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