緣起：
客戶咨詢CD36抗體，隨即問(wèn)了CD36抗體[C1C3]中C1C3代表什么意思？經(jīng)過(guò)deepseek查詢，C1C3代表CD36抗體的克隆號(hào)，是抗體研發(fā)中細(xì)胞株的唯一編號(hào)。克隆號(hào)（C1C3） 是單克隆抗體的唯一標(biāo)識(shí)符，代表抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的，理論上同一克隆號(hào)的抗體應(yīng)具有相同的抗原結(jié)合特異性。
平?？蛻糇稍兛贵w時(shí)，只需要了解三點(diǎn)；1、一抗的宿主來(lái)源（Host：mouse（小鼠）、Rabbit（兔），主要涉及選擇二抗的種屬）；2、樣本種屬，也就是反應(yīng)物種或者反應(yīng)性（Reactivity），一般有human（人）、rat（大鼠）、mouse（小鼠）三種；3、做什么實(shí)驗(yàn)用，也就是應(yīng)用（Application），主要有WB（western blot）、IF（免疫熒光）、IP（免疫共沉淀）、IHC-Fr(冰凍切片免疫熒光)、IHC-P(石蠟切片免疫熒光)，就可以查找到出客戶需要的抗體。那客戶咨詢的克隆號(hào)對(duì)實(shí)驗(yàn)有什么用？
克隆號(hào)的由來(lái)：從“一孔一細(xì)胞”到唯一編號(hào)
抗體克隆號(hào)，是指在生產(chǎn)抗體時(shí)，通過(guò)特定的方法讓抗體細(xì)胞進(jìn)行分裂，然后篩選出與抗原結(jié)合能力最強(qiáng)的單克隆抗體。為了能夠?qū)@些單克隆抗體進(jìn)行標(biāo)識(shí)和管理，每個(gè)克隆抗體都被分配了一個(gè)獨(dú)一無(wú)二的抗體克隆號(hào)。
抗體克隆號(hào)的誕生與單克隆抗體制備技術(shù)密切相關(guān)。單克隆抗體由單個(gè)B細(xì)胞分化增殖形成的細(xì)胞群（即“克隆”）分泌，其制備需通過(guò)以下步驟：
動(dòng)物免疫：將抗原注入小鼠體內(nèi)，激活B細(xì)胞產(chǎn)生抗體；
細(xì)胞融合：提取小鼠脾臟B細(xì)胞，與骨髓瘤細(xì)胞融合形成雜交瘤細(xì)胞；
克隆篩選：通過(guò)有限稀釋法，將雜交瘤細(xì)胞分至96孔板中，確保每孔僅含一個(gè)細(xì)胞來(lái)源的克隆。
克隆號(hào)通常由“數(shù)字+字母”組成，例如“3D6”：
數(shù)字：可能代表篩選批次或孔板位置（如第3個(gè)融合孔）；
字母：常為實(shí)驗(yàn)室自定義代碼（如D6孔位置）。這一編號(hào)系統(tǒng)確保了每個(gè)抗體的唯一性和可追溯性。
單克隆抗體制備時(shí)，首先需要制備融合細(xì)胞，培養(yǎng)好的10^6個(gè)融合細(xì)胞被隨機(jī)分配到有限的96孔板，理論上就有10^6種單抗細(xì)胞株，實(shí)際上有些孔是陰性，有些孔是陽(yáng)性，經(jīng)過(guò)2-4輪陽(yáng)性孔再分配，篩選出抗體特異性和識(shí)別能力最好的細(xì)胞株。篩選的陽(yáng)性抗體編號(hào)一般會(huì)按照第幾塊板，第幾孔編號(hào)，即在制備該單抗的過(guò)程中用96孔板篩選得到的陽(yáng)性克隆的編號(hào)，例如5D3，可能代表第5塊板，D3孔。
按道理，每家公司針對(duì)同一個(gè)抗原表位的抗體的克隆號(hào)應(yīng)該是不一樣，因?yàn)槊考夜久姆绞讲煌?，即使命名的方式相同，挑選到同一個(gè)抗體對(duì)應(yīng)的孔板順序號(hào)相同的概率是1/10^6。
如果出現(xiàn)兩個(gè)公司抗體都為CD36抗體[C1C3]，可能存在4種情況，1、代工生產(chǎn)（貼牌，OEM）；2、雖然都是CD36抗體[C1C3]，但是抗原表位不同：都是挑CD36單克隆，都在C1C3這個(gè)順列號(hào)篩選到滿足要求的抗體，但是識(shí)別的抗原表位不同；3、一家公司無(wú)償公布了CD36抗體[C1C3]的序列，另外公司根據(jù)序列重組表達(dá)獲得此抗體，此時(shí)的抗體一般命名為Recombinant CD36抗體[C1C3]；4、一家公司購(gòu)買或者授權(quán)使用另外一家公司CD36抗體[C1C3]的專利技術(shù)。
所以，同一家公司，克隆號(hào)相同的某種抗體代表制備抗體時(shí)的免疫原序列是相同的。但是不同公司，克隆號(hào)相同的某種抗體的免疫原序列可能不相同。
克隆號(hào)的作用：精準(zhǔn)識(shí)別的“分子指紋”
克隆號(hào)不僅是抗體的標(biāo)識(shí)，更決定了其生物學(xué)特性：
表位特異性：同一抗原的不同表位可能被不同克隆號(hào)抗體識(shí)別，例如新冠病毒S蛋白的RBD區(qū)與NTD區(qū)可能需要不同克隆號(hào)抗體；
實(shí)驗(yàn)兼容性：某些克隆號(hào)抗體適用于Western Blot，另一些則專用于免疫組化（如磷酸化抗體需特定表位識(shí)別）；
批次穩(wěn)定性：同一克隆號(hào)的抗體由同一雜交瘤細(xì)胞系生產(chǎn)，可保證不同批次間性能一致。
抗體克隆號(hào)的意義在于可以方便實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行不同的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和管理。對(duì)于科研人員來(lái)說(shuō)，參考文獻(xiàn)，選擇同一克隆號(hào)的抗體，增加實(shí)驗(yàn)的成功率。對(duì)于生產(chǎn)企業(yè)來(lái)說(shuō)，抗體克隆號(hào)可以管理和追蹤每個(gè)生產(chǎn)批次的抗體，確保產(chǎn)品質(zhì)量。
科研實(shí)例告訴你為什么克隆號(hào)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如此重要
4-1BB是與NF-κB介導(dǎo)的存活信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)的TNFR家族成員。 4-1BB廣泛表達(dá)于免疫系統(tǒng)的活化細(xì)胞，包括活化的T細(xì)胞、NK細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞，其配體4-1BBL在活化的抗原呈遞細(xì)胞上瞬時(shí)表達(dá)，在活化的T細(xì)胞上以低水平表達(dá)。
盡管4-1BBL缺陷的小鼠清楚地證明了4-1BBL在CD8T細(xì)胞對(duì)諸如流感病毒的病毒反應(yīng)中的作用，但4-1BBL在感染小鼠后可能難以檢測(cè)。
Mbanwi Achire N對(duì)此現(xiàn)象進(jìn)行了深入研究，發(fā)現(xiàn)可能是由于LPS活化骨髓衍生的小鼠樹(shù)突狀細(xì)胞后，內(nèi)源性4-1BB和4-1BBL發(fā)生構(gòu)象上相互作用，從而掩蓋其檢測(cè)，故對(duì)4-1BBL表達(dá)的測(cè)量的影響。 進(jìn)一步驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)，克隆號(hào)為TKS-1的4-1BBL抗體檢測(cè)不到感染后小鼠的4-1BBL，但克隆號(hào)為19H3的抗體卻可以。
經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的抗體，為什么不同克隆號(hào)的抗體，在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)中也表現(xiàn)出差異。
在生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，即使經(jīng)過(guò)嚴(yán)格驗(yàn)證的不同克隆號(hào)抗體（即針對(duì)同一靶標(biāo)但由不同雜交瘤細(xì)胞系產(chǎn)生的抗體），在同一實(shí)驗(yàn)中也可能表現(xiàn)出顯著差異。這種現(xiàn)象主要由以下因素導(dǎo)致：
如果實(shí)驗(yàn)中靶蛋白與其他分子結(jié)合（如配體、適配蛋白），可能遮蔽某些表位，影響特定克隆抗體的結(jié)合。
空間位阻：廠家驗(yàn)證的樣本和客戶實(shí)驗(yàn)的樣本來(lái)源不一樣，雖然都是小鼠，但是組織和細(xì)胞部位來(lái)源不一樣，導(dǎo)致抗原表位（Epitope）的差異
親和力差異：不同克隆抗體的可變區(qū)（Fab段）對(duì)表位的結(jié)合強(qiáng)度不同，可能導(dǎo)致信號(hào)強(qiáng)弱差異。
實(shí)驗(yàn)條件與抗體的兼容性：樣本處理：固定（如甲醛固定可能破壞構(gòu)象表位）、變性（SDS-PAGE中的加熱變性可能暴露隱藏表位）或抗原修復(fù)方法（如檸檬酸緩沖液修復(fù)）對(duì)不同克隆抗體的影響不同。
靶蛋白的表達(dá)豐度與狀態(tài)：在低豐度靶標(biāo)的情況下，高親和力抗體可能檢測(cè)到信號(hào)，而低親和力抗體則無(wú)法檢出。如果實(shí)驗(yàn)中靶蛋白與其他分子結(jié)合（如配體、適配蛋白），可能遮蔽某些表位，影響特定克隆抗體的結(jié)合。
總之，當(dāng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示選擇的某一克隆號(hào)抗體效果不錯(cuò)的情況下，千萬(wàn)別輕易更換。
克隆號(hào)對(duì)于雙抗夾心法的抗體對(duì)的意義
雙抗體夾心法中的檢測(cè)抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合位點(diǎn)需要有別于目標(biāo)物與包被抗體結(jié)合的位點(diǎn)，即涉及抗體配對(duì)的問(wèn)題。常用的抗體配對(duì)方法有下幾種：
1）包被抗體為單抗，檢測(cè)抗體為單抗，但這兩種單抗針對(duì)的抗原表位不同；
2）包被抗體為單抗，檢測(cè)抗體為多抗；
3）包被抗體為多抗，檢測(cè)抗體為多抗，這兩種多抗一般來(lái)源于不同的宿主。
其中應(yīng)用最多的是單抗與單抗配對(duì)，這個(gè)時(shí)候克隆號(hào)就尤其重要。
表位特異性（Epitope Specificity）
避免表位重疊：雙夾心法需要兩個(gè)抗體（捕獲抗體和檢測(cè)抗體）同時(shí)結(jié)合目標(biāo)抗原的不同表位（非重疊表位）?？寺√?hào)可明確標(biāo)識(shí)抗體來(lái)源的細(xì)胞克隆，從而確保兩個(gè)抗體針對(duì)不同表位。
避免競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合：若兩抗體克隆號(hào)相同或識(shí)別同一表位，可能導(dǎo)致競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，降低信號(hào)靈敏度或完全無(wú)法檢測(cè)。
空間位阻
不同克隆號(hào)雖然可以避免表位重疊以及競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，但是如果兩個(gè)抗原決定族相隔太近，當(dāng)一個(gè)抗體與抗原決定簇結(jié)合后，阻礙另外一個(gè)抗體的結(jié)合，也無(wú)法形成有效的配對(duì)。
親和力差異
不同克隆號(hào)抗體與對(duì)應(yīng)決定簇結(jié)合后，如果出現(xiàn)親和力太低，導(dǎo)致檢測(cè)信號(hào)弱，也無(wú)法形成有效配對(duì)。
克隆號(hào)在抗體對(duì)中的作用主要體現(xiàn)在確?？贵w識(shí)別不同的抗原表位，大大提高了檢測(cè)的特異性。選擇不同克隆號(hào)的抗體通常有助于避免競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，提高檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性。
雙抗夾心法的抗體對(duì)是如何帥選出來(lái)的？
抗體配對(duì)的原理
通常情況下，一個(gè)抗原分子擁有多個(gè)抗原決定簇，將抗原注射入動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行免疫，針對(duì)不同的抗原決定簇會(huì)產(chǎn)生不同的抗體。產(chǎn)生的抗體具有特異性與專一性，即一個(gè)抗體分子只會(huì)特異性地結(jié)合一個(gè)抗原決定簇。兩個(gè)針對(duì)不同抗原決定簇的抗體，有可能同時(shí)結(jié)合到抗原分子上。如果兩個(gè)抗體同時(shí)結(jié)合到同一個(gè)抗原分子上，那么這兩個(gè)抗體就是配對(duì)抗體。
配對(duì)抗體的篩選
需要注意的是，即使兩個(gè)抗體針對(duì)的是不同的抗原決定簇，也并不意味著這兩個(gè)抗體分子一定可以同時(shí)與抗原分子結(jié)合。當(dāng)一個(gè)抗體與抗原結(jié)合后，有可能會(huì)導(dǎo)致其他結(jié)合位點(diǎn)（抗原決定簇）構(gòu)型的改變，從而導(dǎo)致其他的抗體無(wú)法正常結(jié)合到抗原上。位阻效應(yīng)的存在，也可能使兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)距離較近的抗體無(wú)法同時(shí)結(jié)合在抗原上。因此想要得到可以同時(shí)結(jié)合在抗原分子上的配對(duì)抗體，在制備出抗體后，還需要對(duì)得到的抗體進(jìn)行篩選。
通常，配對(duì)抗體篩選的方法一般采用雙抗夾心ELISA法。篩選的原理為：在陽(yáng)性單克隆抗體里面任意挑選兩個(gè)單克隆抗體，一個(gè)作為捕獲抗體包被在96孔板上，另一個(gè)作為檢測(cè)抗體（HRP酶標(biāo)記）。先加入抗原，孵育后洗去未結(jié)合的抗原，再加入檢測(cè)抗體孵育后洗去未結(jié)合的檢測(cè)抗體，最后加入顯色液顯色。如果可以顯色，說(shuō)明捕獲抗體、檢測(cè)抗體與抗原特異性結(jié)合，該捕獲抗體與檢測(cè)抗體為一對(duì)配對(duì)抗體。如果不能顯色，說(shuō)明捕獲抗體、檢測(cè)抗體不能與抗原結(jié)合，從而被洗脫，該捕獲抗體與檢測(cè)抗體不是配對(duì)抗體。如果選擇的兩個(gè)單克隆抗體不能進(jìn)行配對(duì)，則需重新選擇兩個(gè)單抗，重新進(jìn)行試驗(yàn)，直至篩選出配對(duì)的抗體。
抗體公司針對(duì)同一抗體，可能篩選到多個(gè)陽(yáng)性單克隆抗體，但是，抗體公司并不會(huì)只生產(chǎn)他們認(rèn)為最好的一個(gè)抗體，而是把滿足要求的抗體都生產(chǎn)出來(lái)，利用克隆號(hào)進(jìn)行編號(hào)區(qū)分，最后讓市場(chǎng)來(lái)檢驗(yàn)?zāi)膫€(gè)克隆號(hào)抗體是客戶的最優(yōu)選。
所以抗體其實(shí)不是設(shè)計(jì)出來(lái)的，而是通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證出來(lái)的。
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