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撰文 | 風

調(diào)節(jié)性T細胞（Regulatory T cell，Treg）是機體主要的負調(diào)節(jié)免疫細胞，在維持自身耐受和組織穩(wěn)態(tài)方面發(fā)揮重要作用。自身免疫性疾病是自身耐受打破引起免疫系統(tǒng)攻擊正常組織或器官而引發(fā)的常見疾病，在臨床上表現(xiàn)為頑固性、難治性和復(fù)發(fā)性。因此，增強Treg功能或者穩(wěn)定性是治療自身免疫性或炎癥性疾病的有效策略（詳見BioArt報道：；；）。然而，這一方法仍存在不少技術(shù)瓶頸和障礙，如Treg的制備、功能性和穩(wěn)定性以及靶向遞送等（詳見BioArt報道：）。大規(guī)模CRISPR篩選技術(shù)的出現(xiàn)促進細胞功能和命運相關(guān)重要調(diào)節(jié)因子的鑒定。然而，目前CRISPR在Treg領(lǐng)域的研究多集中天然Treg（nTreg）（詳見BioArt報道：）【1,2】，而在誘導(dǎo)Treg（iTreg）中較少。

近日，日本大阪大學(xué)免疫學(xué)前沿研究中心Shimon Sakaguchi研究團隊在Nature上發(fā)表了文章題為Genome-wide CRISPR screen in human T cells reveals regulators of FOXP3的文章。該文章通過全基因組CRISPR篩選技術(shù)鑒定RBPJ是Treg重要的負調(diào)節(jié)因子，RBPJ缺失維持Treg的功能和穩(wěn)定性，為Treg分化的分子機制和開發(fā)靶向Treg的治療方法提供新的理解和靶點。

為揭示影響FOXP3表達的可能調(diào)節(jié)因子，作者在人原代CD4 T細胞開發(fā)CRISPR篩選平臺，即將全基因組sgRNA文庫腺病毒轉(zhuǎn)染CD4 T細胞配合Cas9蛋白電轉(zhuǎn)后經(jīng)Treg分化培養(yǎng)后行流式檢測和RNA測序。結(jié)果發(fā)現(xiàn)已知的調(diào)控因子如TGFBR1、SMAD3/4、UHRF1和FOXP3，以及新的調(diào)控因子如SMARCB1、MIDN 和SIK3。對于負調(diào)控因子的GO注釋發(fā)現(xiàn)NOTCH調(diào)節(jié)通路基因顯著富集，如RBPJ、HDAC3、GPS2、TBL1XR1和NCOR1/2。同時，作者使用單個基因敲除驗證部分正性和負性調(diào)控因子作用效果?？傊?，作者使用全基因組篩選強調(diào)了FOXP3分子調(diào)節(jié)的多樣性。隨后，為了非偏倚評估可能的FOXP3調(diào)節(jié)因子引起的整體轉(zhuǎn)錄組和選擇性蛋白改變，作者結(jié)合細胞內(nèi)CITE-seq在單細胞層面通過胞內(nèi)FOXP3定量驗證上述挑選的可能調(diào)節(jié)因子。令人振奮的是，作者發(fā)現(xiàn)靶向RBPJ、SIK3和ZBTB7B確實增加FOXP3蛋白的表達。接著，作者應(yīng)用MIMOSCA框架模擬單個基因的遺傳擾動對轉(zhuǎn)錄組的影響，由此建立的調(diào)控模型將227個靶向敲除基因與2192個顯著改變的基因關(guān)聯(lián)起來，這些基因可以進一步聚類為11個協(xié)同功能靶基因模塊（模塊A-K）和10個基因共調(diào)控程序（GP1-10）。其中，GP3和10與T細胞反應(yīng)有關(guān)；GP1與染色質(zhì)調(diào)節(jié)有關(guān)；GP5與IL-2信號有關(guān)；GP6-8與細胞代謝有關(guān)。模塊K的擾動導(dǎo)致細胞代謝轉(zhuǎn)換為無氧糖酵解；模塊G引起效應(yīng)T反應(yīng)、細胞骨架重塑和IL-2信號。值得注意的是，作者發(fā)現(xiàn)針對RBPJ的擾動靶基因之間存在大量調(diào)控互作，表明其可能是iTreg的中心樞紐并受到多種信號的調(diào)節(jié)?？傊?，這些數(shù)據(jù)分析強調(diào)RBPJ作為一種新型FOXP3表達的負調(diào)節(jié)因子。

RBPJ是Notch信號通路的核心轉(zhuǎn)錄因子，通過與Notch受體胞內(nèi)段（NICD）結(jié)合并招募輔激活因子（如MAML1）啟動靶基因轉(zhuǎn)錄【3】。另外，在缺少Notch信號時，RBPJ可與表觀修飾因子（如HDAC3）或轉(zhuǎn)錄抑制因子（如NCOR1/2）結(jié)合直接抑制基因表達【4】。然而，作者發(fā)現(xiàn)Notch信號改變不能引起FOXP3表達改變，排除了RBPJ參與經(jīng)典Notch信號通路調(diào)節(jié)FOXP3表達。同時，nTreg細胞RBPJ敲除卻并不影響FOXP3表達，表明RBPJ的作用具有環(huán)境依賴性。為了排除分化效率引起的混雜因素，作者分選Treg后行RNA-seq直接比較RBPJ敲除引起的轉(zhuǎn)錄組變化，發(fā)現(xiàn)RBPJ敲除上調(diào)FOXP3、IL2RA、ENTPD1、ICOS、TIGIT、HAVCR2 和LRRC32，表明Treg核心特征增強。此外，體外實驗證實RBPJ敲除增強Treg的抑制功能和在炎癥環(huán)境中的穩(wěn)定性。FOXP3的保守非編碼區(qū)（Conserved Non-coding Sequences，CNS）甲基化狀態(tài)影響其轉(zhuǎn)錄表達，在維持Treg功能和穩(wěn)定性發(fā)揮重要作用【5】。作者發(fā)現(xiàn)RBPJ敲除明顯降低FOXP3的CNS2區(qū)域DNA甲基化?？傊?strong>RBPJ敲除促進了iTreg的分化、穩(wěn)定性和功能。

RBPJ如何抑制FOXP3表達？作者使用151個針對RBPJ外顯子的sgRNA篩選對于FOXP3表達抑制的RBPJ蛋白關(guān)鍵功能位點。結(jié)果發(fā)現(xiàn)RBPJ的C末端和DNA結(jié)合功能域（都介導(dǎo)RBPJ與SMRT-NCOR抑制復(fù)合體的結(jié)合）的突變模擬其敲除效應(yīng)可以促進FOXP3的表達。同時，EMSA和熒光報告實驗證實RBPJ直接與FOXP3的promoter區(qū)結(jié)合并調(diào)控轉(zhuǎn)錄。這些數(shù)據(jù)表明RBPJ參與構(gòu)建的NCOR轉(zhuǎn)錄抑制復(fù)合體直接調(diào)節(jié)FOXP3的轉(zhuǎn)錄表達。前已述及，HDAC3是NCOR轉(zhuǎn)錄抑制復(fù)合體的重要部分，作者進一步證實HDAC3敲除可以抑制RBPJ過表達引起的iTreg分化缺陷。CHIP-seq證實RBPJ敲除增加FOXP3基因座H3ac和H3K9ac水平?？傊?，這些結(jié)果表明RBPJ-HDAC轉(zhuǎn)錄抑制復(fù)合體介導(dǎo)的組蛋白去乙?；{(diào)節(jié)FOXP3表達。最后，作者使用異種GvHD模型證實RBPJ敲除iTreg過繼具有和nTreg一致的存活率，同時RBPJ敲除iTreg可以在體內(nèi)長時間維持Treg譜系穩(wěn)定行和免疫抑制功能。

綜上所述，這項研究通過全基因組CRISPR篩選結(jié)合體內(nèi)外實驗鑒定RBPJ是人iTreg的重要負調(diào)控因子。RBPJ通過和HDAC3與NCOR1/2等構(gòu)成轉(zhuǎn)錄抑制復(fù)合體抑制FOXP3的表達進而抑制iTreg的分化、功能和穩(wěn)定性?？傊隧椦芯繛閕Treg分化和功能維持的分子機制以及開發(fā)靶向Treg的炎癥疾病治療提供新的理解和靶點。

https://doi.org/10.1038/s41586-025-08795-5

制版人：十一

參考文獻

1. Chin-San, Loo., Jovylyn, Gatchalian., Yuqiong, Liang., Mathias, Leblanc., Mingjun, Xie., Josephine, Ho., Bhargav, Venkatraghavan., Diana C, Hargreaves., Ye, Zheng.(2020). A Genome-wide CRISPR Screen Reveals a Role for the Non-canonical Nucleosome-Remodeling BAF Complex in Foxp3 Expression and Regulatory T Cell Function.Immunity, 53(1), 0. doi:10.1016/j.immuni.2020.06.011

2. Kathrin, Schumann., Siddharth S, Raju., Michael, Lauber., Saskia, Kolb., Eric, Shifrut., Jessica T, Cortez., et al.(2020). Functional CRISPR dissection of gene networks controlling human regulatory T cell identity.Nat Immunol, 21(11), 0. doi:10.1038/s41590-020-0784-4

3. David, Castel., Philippos, Mourikis., Stefanie J J, Bartels., Arie B, Brinkman., Shahragim, Tajbakhsh., Hendrik G, Stunnenberg.(2013). Dynamic binding of RBPJ is determined by Notch signaling status.Genes Dev, 27(9), 0. doi:10.1101/gad.211912.112

4. H Y, Kao., P, Ordentlich., N, Koyano-Nakagawa., Z, Tang., M, Downes., C R, Kintner., R M, Evans., T, Kadesch.(1998). A histone deacetylase corepressor complex regulates the Notch signal transduction pathway.Genes Dev, 12(15), 0. doi:10.1101/gad.12.15.2269

5. Ye, Zheng., Steven, Josefowicz., Ashutosh, Chaudhry., Xiao P, Peng., Katherine, Forbush., Alexander Y, Rudensky.(2010). Role of conserved non-coding DNA elements in the Foxp3 gene in regulatory T-cell fate.Nature, 463(7282), 0. doi:10.1038/nature08750

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（*排名不分先后）